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自沃森(Watson)、克里克(Crick)的DNA双螺旋模型诞生,生物学进入到了一个全新的时代,在生物学界言必DNA,论必中心法则,对DNA的提取成为生物医药领域甚至农林牧渔等领域内所有学科科学研究的基础,随着基因诊断、转基因食品检测、个性化医疗等的快速发展,现在的核酸提取技术已经不能够满足当今生物技术的需要,急需能够高通量、自动化的核酸提取方法。在这种背景下,磁珠法核酸提取应运而生。
磁珠法核酸提取采用的是生物磁珠。生物磁珠是指具有细小粒径的超顺磁微球,一般具有超强的顺磁性。
1、在磁场中能够迅速聚集,离开磁场后又能够有助于磁分离地均匀分散。
2、具有合适的且差别较小的粒径,保证了足够强的磁响应性又不会沉降。
3、具有丰富的表面活性基团,以便可以和生化物质偶联,并在外磁场的作用下实现与被待测样品的分离。
磁珠法核酸提取,具有传统DNA提取方法无法比拟的优势,主要体现在:
1、能够实现自动化、大批量操作,目前已有96孔的核酸自动提取仪,用一个样品的提取时间即可实现对96个样品的处理,符合生物学高通量的操作要求,使得传染性疾病爆发时能够进行快速及时的应对,这一特点使得传统方法望尘莫及;
2、操作简单、用时短,整个提取流程只有四步,大多可以在36-40分钟内完成;
3、安全无毒,不使用传统方法中的苯、氯仿等有毒试剂,对实验操作人员的伤害减少到最少,完全符合现代环保理念;
4、磁珠与核酸的特异性结合使得提取的核酸纯度高、浓度大。
与传统的分离方法相比,把磁珠用于生化样品复杂组分的的分离,能够实现分离和富集的同时进行,有效地提高了分离速度和富集效率,同时也使分析检测的灵敏度大大提升。
依据与硅胶膜离心柱相同的原理,运用纳米技术对超顺磁性纳米颗粒的表面进行改良和表面修饰后,制备成超顺磁性氧化硅纳米磁珠。该磁珠能在微观界面上与核酸分子特异性地识别和高效结合。利用氧化硅纳米微球的超顺磁性,在Chaotropic盐(盐酸胍、异硫氰酸胍等)和外加磁场的作用下,能从血液、动物组织、食品、病原微生物等样本中分离出DNA和RNA,可应用在临床疾病诊断、输血安全、法医学鉴定、环境微生物检测、食品安全检测、分子生物学研究等多种领域。
1、裂解:破坏细胞结构,使DNA充分游离出来;
2、结合:加入磁珠结合液,使DNA与磁珠结合;
3、洗涤:利用洗涤液去除残留杂质;
4、洗脱:分离DNA与磁珠,得到高质量的DNA溶液。
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